微囊藻毒素对Hela细胞和Vero细胞的毒性效应

ＭＣＹＳＴ－ＬＲ，ＭＣＹＳＴ－ＲＲ，ＭＣＹＳＴ－ＹＲ稀释后的毒素溶液处理Ｈｅｌａ细胞和Ｖｅｒｏ细胞后得到如下结果：１．３种毒素溶液对培养的Ｈｅｌａ细胞均有明显的抑制作用和毒性作用，其毒性作用与浓度成正比．致死细胞边缘不整齐不规则，细胞呈脱水状态．倒置显微镜下可见细胞变黑无折光性．高浓度毒素溶液（包括ＭＣＹＳＴ－ＬＲ，－ＲＲ和－ＹＲ３个样品）作用细胞２４ｈ后，细胞完全致死脱落，３个样品间无明显差别；２．毒素对Ｖｅｒｏ细胞也具一定的抑制和毒性作用，但不如对Ｈｅｌａ细胞的作用强烈；３．在相同稀释浓度下，ＭＣＹＳ

TRAIL in the mandarin fish Siniperca chuatsi: Gene and its apoptotic effect in HeLa cells

Tumor necrosis factor (TNF)-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) is one of the TNF superfamily members, participating in many biological processes including cell proliferation and apoptotic death. In this study, a TRAIL gene was cloned from a perciform fish, the mandarin fish Siniperca chuatsi, a major cultured fish in China's aquaculture, and is named as SCTRAIL for S. chuatsi TRAIL. The full-length cDNA of SCTRAIL is 1359 bp, encoding a 283-amino-acid protein. This deduced protein contains the CYS231, a 23-mer fragment of transmembrane region, a glycosylation site and a TNF family signature, all of which are conserved among TRAIL members. SCTRAIL gene consists of six exons, with five intervening introns, spaced over approximately 9 kb of genomic sequence. Southern blotting demonstrated that the SCTRAIL gene is present as a single copy in mandarin fish genome. A 620 bp promoter region obtained by genome walking contains a number of putative transcription factor binding sites, such as Oct-1, Sp-1, NF-1, RAP-1, C/EBPaLp, NF-kappa B and AP-1. The SCTRAIL is constitutively expressed in all the analyzed tissues, as revealed by RT-PCR, which is confirmed by Western blotting analysis using polyclonal antibody against bacteria-derived recombinant SCTRAIL protein. As an apoptosis-inducing ligand, the overexpression of SCTRAIL but not the mutant SCTRAIL-C203S in HeLa cells induced changes characteristic of apoptosis, including chromatin condensation, nucleus fragmentation, DNA ladder, and increase of sub-G0/G1 cells in FACS analysis. (c) 2007 Elsevier Ltd. All rights reserved.

X射线诱导的HeLa细胞旁效应中ROS和NO关系研究

活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)是辐射诱导的旁效应信号通路中的两个重要信号分子。实验研究了这两种信号分子在HeLa细胞旁效应信号通路中的关系。通过微核实验,发现X射线辐照过的HeLa细胞及其旁观者细胞微核形成明显增加,而二甲亚砜(DMSO)预处理显著抑制了微核形成。另外还发现,接受条件培养基的旁观者细胞的增殖速率增加,而DMSO预处理产生条件培养基的受辐照细胞则使旁观者细胞的增殖速率降低。以上的结果从不同角度证实了HeLa细胞存在X射线诱导的旁效应,且其可以被DMSO预处理所抑制。Western blotting和DAF-FMDA荧光探针检测分别显示出辐照后细胞的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和NO水平均升高,而DMSO预处理则降低其水平。因此,可以推测X射线诱导的HeLa旁效应当中ROS是NO的上游信号。

~(12)C~(6+)离子束诱导HeLa细胞DNA损伤效应

本文研究了HeLa细胞经过12C6+离子束辐照之后的DNA损伤效应,及辐照后p53激活的分子机制。运用中性单细胞电泳技术,检测了HeLa细胞经过4Gy 12C6+离子束辐照间隔0、3、6和12h之后DNA的损伤情况,及0.5、1、2和4Gy 12C6+离子束辐照后即时的DNA损伤情况。同时运用细胞生长实时监测仪监测了HeLa细胞在经过0、0.5和1Gy 12C6+离子束辐照之后的生长变化,并运用AO/EB双染检测了辐照细胞24h后的凋亡情况。另外,利用8mmol/L的咖啡因[抑制ATM(ataxia-telangiectasia,mutated)和ATR(ATM and Rad3-related kinase)]和20μmol/L的wortmannin[抑制ATM和DNA-PK(DNA-dependent protein kinase)]处理HeLa细胞后再进行1Gy 12C6+离子束辐照,通过westernblot检测p53的表达。结果显示,12C6+离子束辐照可造成HeLa细胞的DNA损伤,损伤随剂量升高而升高但随测定间隔时间降低,诱导HeLa细胞发生凋亡;而且辐照后p53表达升高。结果证明12C6+离子束辐照可造成HeLa细胞的DNA损伤并诱导损伤修复及凋亡等效应,损伤效应相关因子p53被激活,并且激活依赖于ATM。

碳离子辐射引起Hela细胞线粒体DNA 4977bp的缺失

<正>线粒体DNA4977bp缺失的累积对衰老的多细胞动物来说是一个显著的特征,同时也与各种肿瘤细胞的迁移和凋亡有关。目前的研究已经证明辐射可特异性地诱导此缺失

碳离子辐射引起Hela细胞线粒体DNA 4977 bp的缺失

背景:线粒体DNA4977bp缺失的累积对衰老的多细胞动物来说是一个显著的特征,同时也与各种肿瘤细胞的转移和凋亡有关。目前的研究已证明辐射可特异性地诱导此缺失的产生,有望将其作为新的DNA水平的辐射损伤生物剂量标记。目的:用聚合酶链反应方法检测碳离子辐射引起的Hela细胞线粒体DNA4977bp突变缺失,并观察碳离子辐射剂量及辐射时间与线粒体DNA4977bp缺失的相关性。设计、时间及地点:细胞DNA水平的对照实验,于2008-10/11在甘肃省兰州市近代物理研究所完成。材料:人宫颈癌细胞Hela细胞株。方法:Hela细胞经2～8Gy的碳离子辐射后,于2～24h各个时间点分别提取包含线粒体DNA的全基因组DNA,并用聚合酶链反应法扩增线粒体DNA4977bp缺失的特异片段,通过限制反应模板浓度和聚合酶链反应循环数的方法进行定性分析。主要观察指标:碳离子辐射剂量及辐射时间对线粒体DNA4977bp缺失的影响。结果:经2Gy辐照处理的Hela细胞在2,4,8,24h4个时间点的检测中均无聚合酶链反应阳性产物,8Gy辐照处理的Hela细胞在12,16,24h3个时间点可检测到线粒体DNA4977bp缺失,且随时间延长而累积。辐照后12hHela细胞在8Gy辐照处理后可检测到线粒体DNA4977bp缺失,辐照后16和24hHela细胞在6,8Gy辐照处理后可检测到线粒体DNA4977bp缺失。结论:碳离子辐射引起的Hela细胞线粒体DNA4977bp缺失存在剂量相关性,且其累计程度可能与辐射时间有关。

X射线致HeLa细胞损伤过程中NADPH氧化酶的作用

以HeLa细胞为实验材料,探讨了NADPH氧化酶在X射线诱导细胞损伤过程中的作用。结果显示,12Gy X射线辐照后细胞内活性氧(ROS)明显增加,在用NADPH氧化酶抑制剂处理后再辐照,则细胞内ROS降低到未辐照水平;同时辐照后NADPH氧化酶细胞质亚基p47phox在细胞质积聚并和细胞膜亚基gp91phox结合;Western blotting检测结果显示,NADPH氧化酶的关键亚基gp91phox的表达量明显增加。以上结果说明,NADPH氧化酶可以被X射线激活,由其介导产生的ROS在X射线诱导HeLa细胞损伤过程中扮演重要角色。

低剂量X射线照射诱导HeLa细胞存活的兴奋效应及适应性反应

采用集落形成法观察了低剂量X射线照射HeLa细胞的存活率。结果表明 ,小于 0 .5Gy的X射线照射细胞的存活率高于对照 ,得到了HeLa细胞存活的“兴奋效应” ,而且在 0 .2 5Gy附近这种效应更为明显 ;低剂量D1(0 .0 5、0 .75Gy)的预照射降低了随后攻击剂量D2 对细胞的损伤程度 ,反映出低剂量照射可诱发细胞存活的“适应性反应”。

NADPH oxidase-mediated generation of reactive oxygen species: A new mechanism for X-ray-induced HeLa cell death

Oxidative damage is an important mechanism in X-ray-induced cell death. Radiolysis of water molecules is a source of reactive oxygen species (ROS) that contribute to X-ray-induced cell death. In this study, we showed by ROS detection and a cell survival assay that NADPH oxidase has a very important role in X-ray-induced cell death. Under X-ray irradiation, the upregulation of the expression of NADPH oxidase membrane Subunit gp91(phox) was dose-dependent. Meanwhile, the cytoplasmic subunit p47(phox) was translocated to the cell membrane and localized with p22(phox) and gp91(phox) to form reactive NADPH oxidase. Our data Suggest, for the first time, that NADPH oxidase-mediated generation of ROS is an important contributor to X-ray-induced cell death. This suggests a new target for combined gene transfer and radiotherapy.

辐射诱导的HeLa细胞旁效应信号通路研究

随着肿瘤认识的不断深入，肿瘤外科学、肿瘤放射治疗学、肿瘤化学治疗学构成了现代肿瘤治疗学的三大支柱，而放射治疗学的研究对于肿瘤的治疗有重要的临床意义。本文通过对HeLa进行辐射来观察其产生的旁效应信号通路，从而对临床工作的起到一定的帮助。辐照过的细胞通过释放信号分子引起周围未辐照细胞产生一系列的生物学反应的现象，称之为辐射诱导的旁效应。活性氧（Reactive oxygen species, ROS）和一氧化氮（Nitric oxide, NO）是辐射诱导的旁效应信号通路中的两个重要信号分子。本文研究了这两种重要的信号分子在辐射诱导的HeLa细胞旁效应信号通路中的关系。通过微核实验，我们发现X射线以及12C6+ 辐照过的HeLa细胞及其旁观者细胞的微核形成明显增加，而1%的二甲亚砜（Dimethyl sulfoxide，DMSO，ROS清除剂）预处理X射线辐照的细胞则显著抑制了受辐照细胞及其旁观者细胞的微核形成。1 Gy的X射线辐照能够抑制细胞的增殖速率而0.5%和1%的DMSO预处理则能减少X射线的增殖抑制作用，并且DMSO预处理的效果与浓度有关：1%的DMSO比0.5%的DMSO处理更大程度的恢复了受辐照细胞的增殖速率。另一方面，接受条件培养基（Conditioned medium）的旁观者细胞的增殖速率增加，而DMSO预处理产生条件培养基的受辐照细胞则使旁观者细胞的增殖速率降低，且DMSO预处理的效果同样与其浓度相关：浓度越高，条件培养基的刺激生长作用越小。Western blotting和DAF-FM DA荧光探针检测分别显示了辐照过后细胞的诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase, iNOS）和NO水平均升高，而DMSO预处理则降低其水平。因此，我们推测在X射线辐照的HeLa细胞旁效应信号通路当中ROS是NO的上游信号。另外，我们采用培养基转移后立即加DMSO或BMS－345541（IKK/NF-κB抑制剂）的方法研究了旁观者细胞当中的旁效应信号通路。我们发现DMSO和BMS－345541均显著抑制了旁观者细胞的NO水平。因此，在旁观者细胞当中ROS与NF-κB均为NO的上游信号

镧、钐、铕及镱化合物对体外培养HeLa细胞的作用

应用细胞培养、扫描电子显微镜、放射自显影及细胞化学等技术研究了镧、钐、铕及镱的15种化合物对体外培养HeLa细胞分裂活性的影响,并对其氯化物的生物效应进行了较系统的研究。实验结果表明当其浓度为1mmol/L时,HeLa细胞有丝分裂指数下降,细胞表面结构紊乱,DAN及RNA合成、细胞内琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶及酸性磷酸酶活性等均发生了变化;浓度为0.01mmol/L时,HeLa细胞有丝分裂指数、细胞表面结构、DAN与RNA合成及细胞内上述三种酶活性均未发生明显变化。